熱循環(huán)儀(Thermal Cycler)是一種用于進行聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)的實驗室設(shè)備，通過控制溫度的循環(huán)來擴增DNA片段。Thermo Fisher Scientific提供多種型號的熱循環(huán)儀，適用于不同的實驗需求。

　　熱循環(huán)儀的基本原理

　　熱循環(huán)儀的工作原理是通過控制反應(yīng)管內(nèi)溫度的升高和降低來實現(xiàn)DNA的變性、退火和延伸過程，從而擴增特定的DNA序列。典型的PCR反應(yīng)包括以下幾個步驟：

　　變性(Denaturation)：高溫(通常為95℃)，使雙鏈DNA分離為單鏈。

　　退火(Annealing)：較低溫度(通常為50-65℃)，引物與單鏈DNA模板結(jié)合。

　　延伸(Extension)：中間溫度(通常為72℃)，DNA聚合酶合成新的DNA鏈。

　　Thermo Fisher熱循環(huán)儀的主要型號

　　以下是Thermo Fisher Scientific幾款常見的熱循環(huán)儀型號及其特點：

　　1. Applied Biosystems™ SimpliAmp™ Thermal Cycler

　　特點：用戶友好、可靠性高、操作界面簡潔。

　　應(yīng)用：適用于常規(guī)PCR實驗。

　　2. Applied Biosystems™ Veriti™ Thermal Cycler

　　特點：多區(qū)溫控技術(shù)，可以在一個儀器中進行多種不同的PCR反應(yīng)。

　　應(yīng)用：需要優(yōu)化多種反應(yīng)條件的實驗。

　　3. Applied Biosystems™ ProFlex™ PCR System

　　特點：模塊化設(shè)計，靈活性高，可以更換不同的模塊以適應(yīng)不同規(guī)格的PCR管和板;支持高通量應(yīng)用。

　　應(yīng)用：大規(guī)模、高通量PCR實驗。

　　使用熱循環(huán)儀的步驟

　　準備PCR反應(yīng)混合物 在無菌條件下，將以下試劑混合在PCR管中：

　　模板DNA

　　正向引物和反向引物

　　dNTPs

　　PCR緩沖液

　　MgCl2(如果緩沖液中不包含)

　　Taq DNA聚合酶

　　無菌水

　　設(shè)置熱循環(huán)儀參數(shù) 根據(jù)實驗需求設(shè)置以下參數(shù)：

　　初始變性：95℃，2-5分鐘

　　循環(huán)參數(shù)(通常30-40個循環(huán))：

　　變性：95℃，30秒

　　退火：50-65℃，30秒(根據(jù)引物的Tm值調(diào)整)

　　延伸：72℃，30秒-1分鐘(根據(jù)擴增片段的長度調(diào)整)

　　最終延伸：72℃，5-10分鐘

　　保溫：4℃

　　加載PCR反應(yīng)管 將PCR反應(yīng)管放入熱循環(huán)儀中，確保放置牢固。

　　啟動熱循環(huán)儀 啟動設(shè)備，選擇預(yù)設(shè)程序或手動輸入?yún)?shù)，開始PCR反應(yīng)。

　　監(jiān)控反應(yīng)進程 反應(yīng)過程中定期監(jiān)控設(shè)備運行情況，確保正常運行。

　　分析PCR產(chǎn)物 反應(yīng)完成后，通過瓊脂糖凝膠電泳等方法分析PCR產(chǎn)物。

　　注意事項

　　無菌操作：確保實驗過程中的無菌環(huán)境，避免樣品污染。

　　合理設(shè)置參數(shù)：根據(jù)實驗需求優(yōu)化溫度和時間設(shè)置，確保PCR反應(yīng)的效率和特異性。

　　試劑質(zhì)量：使用高質(zhì)量的試劑，確保實驗結(jié)果的可靠性。

　　設(shè)備維護：定期對熱循環(huán)儀進行校準和維護，確保設(shè)備的正常運行和準確性。

　　使用Thermo Fisher Scientific的熱循環(huán)儀可以幫助你高效地進行PCR實驗，滿足各種分子生物學(xué)和基因研究的需求。