養(yǎng)細胞是一件戳心戳肺的事情，你要像照顧小孩一樣仔細對待，愛護她，呵護她。如果你照顧的時候能注意這些問題，會讓你的細胞養(yǎng)的更好。下面小編就將養(yǎng)細胞的注意事項跟大家交流一下。

細胞培養(yǎng)前的準備

細胞變質(zhì)的征象包括核周出現(xiàn)顆粒、細胞與基質(zhì)解離以及細胞質(zhì)空泡形成。

這些變質(zhì)征象可能為多種原因所致，例如：培養(yǎng)物污染、細胞系衰老或培養(yǎng)基中存在毒性物質(zhì)，或者這些征象僅表明培養(yǎng)物需要更換培養(yǎng)基。

變質(zhì)嚴重時將會成為不可逆的變化。

細胞培養(yǎng)通風櫥的消毒及布局

保持細胞培養(yǎng)通風櫥內(nèi)的整潔有序，將所有物品置于直視范圍內(nèi)。

向放入通風櫥內(nèi)的所有物品噴灑70%乙醇，擦拭清潔進行消毒。

在通風櫥中部開闊處放置細胞培養(yǎng)容器；移液器置于右前方易于取用；試劑和培養(yǎng)基置于右后方便于吸??；試管架置于中后部；小型容器置于左后部用于盛放廢液。

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培養(yǎng)瓶/皿等物品的無菌操作

細胞培養(yǎng)污染物主要分為兩類：化學污染物,如培養(yǎng)基、血清和水中的雜質(zhì)、內(nèi)毒素、增塑劑和去污劑。

生物污染物，如細菌、霉菌、酵母、病毒、支原體以及其他細胞系的交叉污染。

可通過充分了解污染源以及采用良好的無菌技術，降低污染發(fā)生的頻率和嚴重程度。

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交叉污染的確認

為細胞換液時，要沿著培養(yǎng)瓶的一側輕輕地加入，而不是直接加到細胞中，以免損傷細胞，當培養(yǎng)的細胞株較為脆弱時尤其需要注意。

使用無菌玻璃吸管或一次性塑料吸管和移液器操作液體時，每支吸管只能使用一次，以免交叉污染。

細胞傳代的時間把握

當細胞呈指數(shù)增殖，貼壁培養(yǎng)的細胞已占據(jù)所有可用基質(zhì)、沒有擴增空間，或懸浮培養(yǎng)的細胞已超過培養(yǎng)基質(zhì)所支撐的能力，無法進一步生長時，細胞增殖速度將大大降低甚至wanquan停止。

為了將細胞密度維持在最佳水平，以便細胞繼續(xù)生長，并且刺激進一步增殖，必須對細胞進行傳代。

細胞培養(yǎng)中使用抗生素的注意事項

細胞培養(yǎng)時不應長期使用抗生素，因為連續(xù)使用抗生素會促進抗生素耐藥性細胞株的產(chǎn)生，導致輕度污染持續(xù)存在。

抗生素只能作為對付污染的最后手段短期使用，并盡快撤除。

如果長期使用抗生素，則應同時進行無抗生素培養(yǎng)，以便作為鑒別隱性感染的對照。

細胞凍存的必要性

連續(xù)培養(yǎng)的細胞系容易發(fā)生遺傳漂變，有限細胞系最終會發(fā)生衰老，所有培養(yǎng)的細胞都易受到微生物污染，即使運轉(zhuǎn)情況zuihao的實驗室也會遇到設備故障的問題。

由于已建立的細胞系是一種寶貴資源，更換細胞系成本高昂，而且耗費時間，因此，必須將其冷凍起來，長期保存。

細胞凍存的必要性

連續(xù)培養(yǎng)的細胞系容易發(fā)生遺傳漂變，有限細胞系最終會發(fā)生衰老，所有培養(yǎng)的細胞都易受到微生物污染，即使運轉(zhuǎn)情況zuihao的實驗室也會遇到設備故障的問題。

由于已建立的細胞系是一種寶貴資源，更換細胞系成本高昂，而且耗費時間，因此，必須將其冷凍起來，長期保存。

細胞凍存的事項

應在細胞濃度高的情況下進行細胞培養(yǎng)凍存，并且細胞傳代的次數(shù)盡可能少。

在凍存前確保活細胞的百分比至少為90%。請注意，最佳凍存條件取決于所用細胞系。

凍存和復蘇過程對大多數(shù)細胞都會造成不利影響，因此不要通過渦旋震蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細胞脫落（培養(yǎng)昆蟲細胞時除外），也不要高速離心細胞。

凍存培養(yǎng)基的選擇

凍存細胞時必須選擇凍存培養(yǎng)基，凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO或者甘油等冷凍保護劑。

還可使用專門配制wanquan凍存培養(yǎng)基，例如Sigma、Gibco的細胞凍存培養(yǎng)基。

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細胞培養(yǎng)溫度的設定

細胞培養(yǎng)的最佳溫度主要取決于細胞供體的體溫，此外也受到解刨部位體溫差異的影響，例如：皮膚溫度低于骨骼肌的溫度。

與溫度過低相比，細胞培養(yǎng)時溫度過高是更為嚴重的問題；因此，往往將培養(yǎng)箱的溫度設定為略低于最佳溫度。

各類細胞培養(yǎng)的最佳溫度

大多數(shù)人和哺乳動物細胞系在36℃~37℃下具有最佳生長狀態(tài)。

昆蟲細胞在27℃具有最佳生長狀態(tài)；在低于27℃以及27至30℃范圍內(nèi)，細胞生長較慢。

溫度超過30℃時，昆蟲細胞活力降低，即使溫度降至27℃，細胞活力也無法恢復。

禽類細胞系在38.5℃時具有最佳生長狀態(tài)。雖然此類細胞也可在37℃下培養(yǎng)，但其生長速度會變慢。

來源于冷血動物（例如：兩棲動物、冷水魚）的細胞系可耐受很寬的溫度范圍，為15-26℃。

請注意每種細胞的培養(yǎng)條件均有所不同，偏離某種細胞所需的培養(yǎng)條件會導致細胞表型異常，甚至培養(yǎng)wanquan失敗。

因此，我們建議您應熟悉自己使用的細胞系，實驗中嚴格遵守所有產(chǎn)品附帶的操作說明。

細胞培養(yǎng)的最適pH

大多數(shù)正常的哺乳動物細胞系都能在pH值為7.4的環(huán)境中生長良好，而且不同細胞株間差異極小。

但是，目前發(fā)現(xiàn)有些轉(zhuǎn)化細胞系在輕度偏酸性的環(huán)境中即pH7.0-7.4時生長較好，而有些正常的成纖維細胞系更適合輕度偏堿性的環(huán)境即pH為7.4-7.7。

Sf9和Sf21等昆蟲細胞系zuishihe在pH值為6.2的環(huán)境中生長。

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細胞培養(yǎng)基最適pH的控制

細胞培養(yǎng)基可控制培養(yǎng)體系的pH值，為培養(yǎng)的細胞緩沖pH值的變化。

這種緩沖作用通常是通過添加有機緩沖鹽（例如：HEPES）或者二氧化碳-碳酸氫鹽緩沖鹽實現(xiàn)。

由于培養(yǎng)基的pH值取決于溶解態(tài)二氧化碳與碳酸氫鹽間的精密平衡，因此空氣中二氧化碳含量的變化會改變培養(yǎng)基的pH值。

為此，使用二氧化碳-碳酸氫鹽緩沖鹽培養(yǎng)基時必須使用外源性二氧化碳，特別是使用開放式培養(yǎng)皿培養(yǎng)細胞或者進行高濃度的轉(zhuǎn)化細胞系培養(yǎng)時。

細胞培養(yǎng)中血清的保存

細胞培養(yǎng)中所用的血清不盡相同，您需要根據(jù)您所培養(yǎng)的細胞種類和培養(yǎng)要求來挑選出zuishihe的血清。

我們建議將血清保存在-10至-20℃，若存放于4℃，請勿超過一個月。

若您無法一次用完一瓶，建議您將血清無菌分裝至合適體積的滅菌容器內(nèi)，再放回冷凍箱保存。

解凍血清時，建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱過夜融解，然后在室溫下使之全融。需要注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。

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如何在細胞鋪板時避免“邊緣效應"

細胞實驗鋪板時，為避免“邊緣效應"，以應用96孔板的中間60孔為最佳，一般四周的一圈邊緣孔不養(yǎng)細胞，只做空白或陰性對照。

鋪板時，細胞懸液一定要混勻，以避免細胞沉淀下來而導致每孔中的細胞數(shù)量不等，可以每接幾個就再混勻一下。

加樣器操作要熟練，盡量避免人為誤差。此外，吹散次數(shù)過多也會影響細胞活力。所以要熟練操作，盡快上板。