一般實(shí)驗(yàn)室在確定培養(yǎng)基種類后,還會(huì)遇到培養(yǎng)基有不同分型的情況。那么對(duì)于經(jīng)典培養(yǎng)基中不同成分的作用及選擇原則又是什么呢?請(qǐng)往下看 ~
1.葡萄糖(Glucose):
作用:細(xì)胞生長(zhǎng)所需的主要能量來(lái)源。
? 如何選擇不同葡萄糖含量的培養(yǎng)基?
最初的 DMEM 中,葡萄糖濃度為 1 g/L,現(xiàn)在稱其為低糖型 DMEM,適合培養(yǎng)多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞;
高糖型 DMEM 中的葡萄糖濃度為 4.5 g/L,適合生長(zhǎng)速度快,附著性較差的腫瘤細(xì)胞;
使用無(wú)糖培養(yǎng)基的主要目的是,通過(guò)控制細(xì)胞的能量來(lái)源,研究細(xì)胞的代謝過(guò)程或葡萄糖利用效率
2.HEPES:
作用:pH 緩沖劑。
是一種氫離子緩沖劑,其作用不依賴于 CO2;
在一定范圍內(nèi)對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用,能較長(zhǎng)時(shí)間控制恒定的 pH 范圍,保證細(xì)胞良好生長(zhǎng);
部分細(xì)胞對(duì)酸堿度的變化非常敏感,建議使用 HEPES;
根據(jù)需要,非必需。
3.L-谷氨酰胺(L-glutamine):
作用:L-谷氨酰胺是一種氨基酸,細(xì)胞的重要能量來(lái)源,參與蛋白質(zhì)的合成,也為合成核酸提供碳源。
? 存在的不足:
L-谷氨酰胺不穩(wěn)定,在中性的水溶液中會(huì)自發(fā)降解;
降解產(chǎn)物氨對(duì)細(xì)胞有毒性;
對(duì)氨敏感的細(xì)胞(如干細(xì)胞和原代細(xì)胞等)或培養(yǎng)環(huán)境(高密度反應(yīng)器,無(wú)補(bǔ)料的長(zhǎng)期培養(yǎng))不推薦含 L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基。
? 解決方案:
選擇不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基,在使用前再添加 L-谷氨酰胺,并盡快用完;
選擇穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物,如 glutaGRO。
4.酚紅(Phenol red):
作用:pH 值的指示劑(中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色)。
? 何時(shí)選擇不含酚紅的培養(yǎng)基?
培養(yǎng)干細(xì)胞或細(xì)胞克隆時(shí)傾向于不加酚紅;
酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素);
酚紅的顏色會(huì)干擾流式檢測(cè),不建議使用含酚紅的培養(yǎng)基制備細(xì)胞樣品(通常用 PBS)。
5.碳酸氫鈉(Sodium bicarbonate):
作用:pH 緩沖劑。
pH 6.8~7.8 為細(xì)胞生長(zhǎng)的最佳 pH 條件;
多數(shù)培養(yǎng)基利用碳酸氫鈉進(jìn)行緩沖;
碳酸氫鈉的緩沖需要 CO2;
1.高碳酸氫鈉(1.5~3.7 g/L)需要 5~10% CO2 培養(yǎng);
2.低碳酸氫鈉(0.35 g/L)不需要 CO2 培養(yǎng)。
干粉培養(yǎng)基在配制時(shí)需要單獨(dú)添加。
6.丙酮酸鈉(Sodium pyruvate):
作用:能量來(lái)源。
丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源;
葡萄糖不足的時(shí)候,細(xì)胞可以代謝丙酮酸鈉;
保證細(xì)胞更好地生長(zhǎng);
根據(jù)需要,非必需組分。