微生物在生長過程中,機(jī)體內(nèi)的復(fù)雜代謝過程可以相互協(xié)調(diào)、相輔相成,導(dǎo)致微生物的生理活動過程同環(huán)境高度地統(tǒng)一起來,這也是微生物分布廣、適應(yīng)性強(qiáng)的原因之一。微生物內(nèi)外環(huán)境的統(tǒng)一都是通過新陳代謝來實(shí)現(xiàn)的。
一、代謝類型
在生物的機(jī)體內(nèi)部存在著一系列復(fù)雜的代謝過程,根據(jù)這些代謝過程的生理作用可以將它們分為三個基本的代謝類型,即以產(chǎn)能和提供小分子中間體碳架物質(zhì)為目的的分解代謝類型,以合成氨基酸、核苷酸等單體為目的的代謝類型和以合成蛋白質(zhì)、核酸等多聚體為目的的代謝類型。每種代謝類型都是由一系列的有關(guān)代謝途徑組成,而且每一種代謝途徑都是由一些密切相關(guān)的、具體的酶促反應(yīng)過程組成。本書中大多數(shù)培養(yǎng)基是用于細(xì)菌培養(yǎng)的,因此主要介紹細(xì)菌的新陳代謝。
細(xì)菌的新陳代謝包括一系列復(fù)雜的生化反應(yīng),都是在各種不同的酶的催化作用下進(jìn)行的。細(xì)菌的代謝包括分解代謝(異化作用)和合成代謝(同化作用)兩個方面。分解代謝是將各種復(fù)雜的有機(jī)物質(zhì)分解為簡單的小分子物質(zhì),并產(chǎn)生能量(ATP)和還原力,一方面提供合成菌體成分的原料,一方面從物質(zhì)分解中獲取能量以供代謝所需。合成代謝則相反,它是將簡單的化合物合成為復(fù)雜的菌體成分,以保證紙菌的生長繁殖。分解代謝與合成代謝相輔相成,同時(shí)進(jìn)行兩種代謝過程中均可生成多種中間代謝產(chǎn)物,其中有一些在醫(yī)學(xué)上有重要意義。
細(xì)菌的代謝與其他生物相比,具有下列特點(diǎn):①代謝十分活躍。由于細(xì)菌菌體小,表面積大,與外界環(huán)境接觸密切,物質(zhì)交換頻繁,營養(yǎng)物質(zhì)可以很快被吸收,代謝產(chǎn)物可以迅速被排出,故細(xì)
菌的代謝活動非?;钴S,大多數(shù)細(xì)菌約20min即可繁殖一代。②代謝類型多祥化,細(xì)菌的適應(yīng)性很強(qiáng),在各種不同的環(huán)境條件下,總有一些不同種類的細(xì)菌能適應(yīng)于各種各樣環(huán)境條件,形成多種多樣的代謝類型。細(xì)萆代謝類型的多樣化,表現(xiàn)在各種細(xì)菌的營
養(yǎng)要求不同,能量來源、生物氧化類型不同,代謝產(chǎn)物亦各不相同。二、細(xì)菌的代謝過程
1.糖的分解營養(yǎng)物質(zhì)中的多糖類物質(zhì),先經(jīng)細(xì)菌分泌的胞外酶作用,分解為單糖(葡萄糖),然后才被吸收利用。由多糖—單糖丙酮酸這一基本過程,各菌都一樣,丙酮酸的進(jìn)一步分解,則需氧菌與厭氧菌有所不同。需氧菌將丙酮酸通過三羧酸循環(huán)可*分解為二氧化碳與水,在此過程中亦可產(chǎn)生種種中間代謝產(chǎn)物;厭氧菌則發(fā)酵丙酮酸,產(chǎn)生多種酸類(如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸、琥珀酸等)、醛類(如乙醛)、醇類(如乙醇、乙酰甲基甲醇、2,3-丁烯-•.醇、異丙醇、丁醇等)、酮類(如丙酮)。在無氧條件下,不同細(xì)菌對丙酮酸發(fā)酵途徑不同,產(chǎn)物也不一樣。
2.蛋白質(zhì)的分解蛋白質(zhì)的分解,一般是先由細(xì)菌分泌胞外酶,將復(fù)雜的蛋白質(zhì)分解為短肽(或氨基酸),吸收人菌體,然后再由胞內(nèi)酶將肽類分解為氨基酸。明膠液化、酪蛋白胨化等,都是蛋白質(zhì)分解的反應(yīng)。能分解氨基酸的細(xì)菌很多,其分解能力也各不相同,気基酸的分解有脫氨與脫羧兩種方式。脫氨反應(yīng)是靠細(xì)菌脫氨酶的作用,氨基酸經(jīng)氧化、還原、分解等方式脫去気基,生成氨和各種酸類,如:
5(^H,GN+6^0-■谷氨酸6CH,COOH+2CH乙酸(CHj)2COOH+5NH,+5CO丁酸+1^脫羧作用則是由細(xì)菌的氨基酸脫竣酶之作用,使氨基酸的羧基脫出,生成胺類(如組織胺等)和二氧化碳。組織胺有擴(kuò)張毛細(xì)血管、增加血管通透性的作用,可能和細(xì)菌感染后局部充血水腫有關(guān)。
3.細(xì)苗的合成代謝細(xì)菌的合成代謝與其他生物細(xì)胞相似,能利用營養(yǎng)物質(zhì)為原料,合成菌體的各種成分如蛋白質(zhì)、多糖、月旨類、核酸等,并能合成一些其他的代謝產(chǎn)物,分泌于菌體外。
三、細(xì)菌的代謝產(chǎn)物
(一)分解性代謝產(chǎn)物和細(xì)菌的生化反應(yīng)
各種細(xì)菌所具有的酶不*相同,對營養(yǎng)物質(zhì)的分解能力亦不一致,其代謝產(chǎn)物也不一樣,可借以區(qū)別和鑒定細(xì)菌的種類。通過生化試驗(yàn)的方法檢測細(xì)菌對各種基質(zhì)的代謝作用及其代謝產(chǎn)物,從而鑒別細(xì)菌的反應(yīng),統(tǒng)稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)(biochemicalre-action3)細(xì)菌的生化反應(yīng)有許多種,常用的如下。
1.糖發(fā)酵試驗(yàn)發(fā)酵糖類的細(xì)菌通常屬兼性厭氧菌,經(jīng)發(fā)酵過程,糖類被分解和斷裂成兩個丙糖碳分子,再進(jìn)一步分解成一些碳原子的化合物,最終產(chǎn)物因菌種不同而各異,因存在于該菌種的酶系統(tǒng)和環(huán)境條件不同,細(xì)繭分解糖類的能力和分解產(chǎn)物均不同,借此可以鑒別細(xì)菌。例如大腸埃希菌能分解乳糖和葡萄糖,而沙門菌只能分解葡萄糖,不能分解乳糖。大腸埃希菌有甲酸解氫酶,能將分解糖所生成的甲酸進(jìn)一步分解為二氧化碳與氫氣,故產(chǎn)酸又產(chǎn)氣。
傷寒沙門菌無甲酸解氫酶,分解葡萄糖僅產(chǎn)酸而不產(chǎn)氣。
2.VP試驗(yàn)用于檢査葡萄糖代謝產(chǎn)生的中性最終產(chǎn)物乙酰甲基甲醇,大腸埃希菌和產(chǎn)氣桿菌均能分解葡萄糖與乳糖,產(chǎn)酸產(chǎn)氣,二者不易區(qū)別。但產(chǎn)氣桿菌能使丙酮酸脫羧,生成中性的乙酰甲基甲醇(acetylmethylcarbinol),乙酰甲基甲醇在堿性溶液中被空氣中的氣所氧化,生成二乙酰(diacetyl),二乙酰與培養(yǎng)基中含有
這一反應(yīng)稱為VP試驗(yàn)(VogesProskauertest)陽性。大腸埃希菌不生成乙酰甲基甲醇,VP試驗(yàn)陰性。有些細(xì)菌,特別是蜂房哈夫尼亞腸桿菌,在37弋培養(yǎng)時(shí)VP結(jié)果不穩(wěn)定,但在25%:?30X:下則呈陽性。因此,懷疑為蜂房哈夫尼亞腸桿菌時(shí),可重復(fù)VP試驗(yàn)并在25%:培養(yǎng)。
3.甲基紅試驗(yàn)(MR)是用酸堿指示劑甲基紅測定細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖時(shí)產(chǎn)生的氫離子濃度(pH)。腸桿菌科的細(xì)菌都發(fā)酵葡萄糖,在葡萄糖肉湯中培養(yǎng)18~24h后引起發(fā)酵,腸道菌起初都呈甲基紅陽性反應(yīng),然后迸一步培養(yǎng)(2~5天)之后,那些甲基紅陽性菌繼續(xù)產(chǎn)生更多酸,培養(yǎng)基保持酸性(pH4.5或以下),例如大腸埃希菌分解葡萄糖時(shí),故培養(yǎng)液酸性較強(qiáng),pH在4.5或以下,甲基紅指示劑呈紅色,為甲基紅試驗(yàn)陽性。甲基紅試驗(yàn)陰性菌如產(chǎn)氣桿菌分解葡萄糖所產(chǎn)生的2分子酸性的丙酮酸轉(zhuǎn)變?yōu)?分子中性的乙酰甲基甲醇,故生成的酸類較少,培養(yǎng)液最終pH較高,在PH5.4以上,以甲基紅作指示劑時(shí)溶液呈橘黃色,為甲基紅試驗(yàn)(methylredtt)陰性。甲基紅試驗(yàn)的正確性取決于足夠的培養(yǎng)時(shí)間,35^?37T至少培養(yǎng)2天。
4.靛基質(zhì)試驗(yàn)檢査細(xì)菌分解色氨酸生成綻基質(zhì)的能力,有些細(xì)菌如大腸埃希菌、普通變形桿菌、霍亂弧菌等含有色氨酸酶,如在培養(yǎng)液中加人對二甲基氨基(p-dimethylaminobenzaldehyde),則與吲哚結(jié)合生成玫瑰吲哚(rosindole)呈紅色。為吲哚試驗(yàn)陽性。
堪亂弧菌除能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚外,還能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。在濃硫酸存在時(shí),亞硝酸鹽生成亞硝酸,吲哚與亞硝酸化合成亞硝基吲哚(nitroso-indole),亦呈紅色,此反應(yīng)稱為霍亂紅反應(yīng)(choleraredreaction)等)能分解胱氨酸生成硫化氫,如遇醋酸鉛或硫酸亞鐵,生成黑色的硫化鉛或硫化鐵,可借以鑒別細(xì)菌。
6.檸樣酸鹽利用試驗(yàn)是否能利用擰檬酸鹽作為代謝的碳源,并使培養(yǎng)基呈堿性。某些細(xì)菌(如產(chǎn)氣桿菌)能利用擰檬酸鹽作為碳源,能在除擰檬酸鹽外不含其他碳源的培養(yǎng)基上生長,分解擰檬酸鹽生成碳酸鹽,使培養(yǎng)基(pH原在7.0以下)由酸性變?yōu)閴A性,培養(yǎng)基中的指示劑溴麝香草酚藍(lán)(BTB)由淡綠色轉(zhuǎn)為深藍(lán)色,為擰檬酸鹽利用試驗(yàn)陽性。大腸埃希菌不能利用擰檬酸鹽作為碳源,在此培養(yǎng)基上不能生長,培養(yǎng)基顏色不變,結(jié)果為陰性。